facebook
twitter
vk
instagram
linkedin
google+
tumblr
akademia
youtube
skype
mendeley
Wiki
Global international scientific
analytical project
GISAP
GISAP logotip

Использование глутаргина в экспериментальной офтальмотравматологии

Автор Доклада: 
Непорада К. С., Горлачова П. М.
Награда: 
Использование глутаргина в экспериментальной офтальмотравматологии

УДК 616-001-092.9:615

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГЛУТАРГИНА В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ОФТАЛЬМОТРАВМАТОЛОГИИ

Непорада Каринэ Степановна, проф., д.мед. наук,
ВГУУ Украины «Украинская медицинская стоматологическая академия»
Горлачова Полина Михайловна, соискатель

На модели травматического повреждения роговицы глаза кролей доказана эффективность прекурсора оксида азота – глутаргина, о чем свидетельствует нормализация NO – эргической системы и предупреждение повышенного катаболизма коллагеновых и неколлагеновых белков стромы.
Ключевые слова: травма, роговица, глутаргин, оксид азота, оксипролин, фукоза.

Актуальность: Проникающие ранения глаза занимают одно из первых мест по инвалидности органа зрения. Ранения переднего отдела глазного яблока составляют 75-92,6% от общего числа проникающих травм глаза, из которых ранения роговицы составляют 55-65% от общего количества травм глаза [1, 4].Поэтому несмотря на успехи, достигнутые в консервативном лечении травм роговицы, продолжается поиск наиболее эффективных препаратов, влияющих на ускорении регенерации, формирование более нежного рубца роговицы, обладающих низким спектром побочных явлений, адекватной себестоимостью для пациента.

Многочисленными исследованиями последних лет установлено ведущая роль оксида азота в патогенеземногих заболеваний и эффективность NO – терапии для регенерации тканей [2,3].

Цель исследования: изучить в эксперименте влияние 4% раствора глутаргина, как донатора оксида азота, на процессы регенерации роговицы в условиях травмы.

Материалы и методы исследования: Эксперименты выполнены на 35 кролях ( 70 глаз) породы «Шиншилла» (весом 2,0 – 2,5 кг), которые находились в соответствующих санитарно – гигиенических условиях вивария ВГУУ Украины «Украинская медицинская стоматологическая академия» и получали сбалансированное питание. Все эксперименты проводились с соблюдением рекомендаций по проведению медико – биологических исследований согласно Европейской конвенции.

Моделирование травмы роговицы проводили в асептических условиях под местной анестезией (ретробульбарное введение 1,5 мл 2% раствора новокаина с двухразовой инстилляцией эпибульбарно 0,5% раствора алкаина). Проникающую травму роговицы проводили осколком лезвием, которое фиксировали лезвиедержателем. Формировали линейный разрез в центральной части роговицы, длиной около 3 мм. Животные были разделены на группы: 1) интактные (10 глаз); 2) травма роговицы, эвтаназия на 7 сутки (10 глаз); 3) экспериментальная коррекция повреждения роговицы (30 глаз) 4% раствором глутаргина (ТОВ «Фармацевтична компанія «Здоров'я») в виде субконъюктивальных инъекций (по 0,2 мл 1 раз в сутки) и инстилляций (по 2 капли 6 раз в день) на протяжении 5 дней; 4) коррекция повреждения роговицы (20 глаз) препаратом 1% тиотриазолин (ТОВ «Дослідний завод «ГНЦЛС») в виде субконъюктивальных инъекций (по 0,2 мл 1 раз в сутки) и инстилляций (по 2 капли 6 раз в день) на протяжении 5 дней. Эвтаназию животных проводили под тиопенталовым наркозом.

В гомогенате роговицы определяли содержание свободного оксипролина - методом Тетянец С.С. (1985) [5], фукозы – методом Шараева П.Н. и соавт. [6]. Активность NO – синтазы определяли по разнице концентрации нитрит - анионов до и после инкубации гомогената роговицы глаза кролей в среде, которая содержит аргинин и НАДФН [7]. Концентрацию нитрит - аниона определяли путем образования диазосоединений в реакции с сульфаниловой кислотой, потом проводили реакцию с α-нафтилетилендиамином, в результате которой образуются производные красного цвета. Интенсивность окраски раствора прямопропорциональна концентрации нитритов, которую выражали в мкмоль/г [7].

Полученные результаты экспериментальных исследований проанализированы с использованием методов вариационной статистики при помощи критерия Стьюдента.

Результаты исследования:

Нами установлено, что содержание нитрит - анионов, как конечных продуктов метаболизма оксида азота, в гомогенате роговицы на 7 день после травмы достоверно в 2,74 раза уменьшается по сравнению с интактными животными (р<0,05)Пятидневное введение глутаргина после травмы роговицыспособствовало - увеличению в 2,2 раза нитрит - аниона по сравнению с животными, которым моделировали травму роговицы без коррекции (табл.1). Коррекция 1% тиотриазолином, который широко использують в офтальмотравматологии способствует снижению в 1,2 раза нитрит - анионовов посравнению с животными без коррекции (табл.1).

Введение 4% раствора глутаргина субъконьюктивально и эпибульбарно способствовало достоверному увеличению в 3,5 раза активности NO – синтазы в роговице по сравнению с животными без коррекции. В то же время коррекция 1% тиотриазолином эпибульбарно и субконьюктивально способствоваладостоверному увеличению в 2,5 раза активности NO – синтазы в роговице по сравнению с животными без коррекции (табл.1).

Таким образом, травматическое повреждение роговицы способствует достоверному уменьшению активности NO – синтазы и содержанию нитрит – аниона, что характеризует сниженную продукцию оксида азота. Глутаргин, как прекурсор оксида азота способствует достоверному увеличению активностиNO – синтазы и нитрит – аниона, что увеличивает регенерирующие свойства роговицы глаза после травмы.

Содержание свободного оксипролина в гомогенате роговицы достоверно в 3,7 раза увеличивается у животных на 7 день после травмы по сравнению с интактными животными, что характеризует активацию катаболизма коллагеновых белков стромы. Экспериментальная коррекция глутаргином способствует уменьшению в 2,3 раза содержание свободного оксипролина по сравнению с группой животных с повреждениями роговицы без коррекции (р<0,05) и в 1,7 раза уменьшается сравнительно с експериментальной коррекцией титриазолином (табл.2).

Строма роговицы состоит из соединительной ткани, экстрацеллюлярный матрикс которой содержит коллагеновые и неколлагеновые белки. К неколлагеновым белкам стромы роговицы относятся протеогликаны, класса кератан – сульфат и гликопротеиды, мономером олигосахаридных цепей которых является фукоза. Нами установлено, при повреждении роговицы на 7 сутки содержание свободной фукозы в роговице достоверно увеличивается в 4,3 раза по сравнению с интактными животными (табл. 2). Экспериментальная коррекция 4% раствором глутаргина способствует уменьшению в 2,6 раза содержания свободной фукозы по сравнению с животными без коррекции (табл.2). Введение тиотриазолинаспособствует достоверному снижению в 2,2 раза содержания свободной фукозы по сравнению с животными без коррекции (табл.2).

Таким образом, при повреждении роговицы глаза на 7 сутки достоверно возрастает содержание свободного оксипролина и фукозы, что свидетельствует о повышенной деполимеризации коллагеновых и неколлагеновых белков стромы роговицы. Введение 4 % раствора глутаргина в течении 5 дней способствовало достоверному снижению свободного оксипролина и фукозы, что предупреждает повышенный катаболизм биополимеров стромы роговицы при травме.

Таблица 1.

Содержание нитритов, NOS в гомогенате роговицы при травме в условиях экспериментальной коррекции, (М+m)

Группы животных

Содержание нитритов, мкмоль[NO2]/г

Активность NOS,

мкмоль[NO2]/(г*мин)

1. Интактные животные (n=10)

2. Травма роговицы, эвтаназия на 7 сут. (n=10)

3. Травма роговицы, коррекция

глутаргином (n=30)

4. Травма роговицы, коррекция

тиотриазолином (n=20)

4,68+0,13

1,71+0,10

3,71+0,13

 

1,45+0,06

0,26 +0,07

0,06 +0,05

0,21 +0,04

 

0,15 +0,06

Статистический показатель

Р1-2<0,05
Р2-3<0,05
Р2-4<0,05

Р1-2<0,05
Р2-3<0,05
Р2-4>0,05

Примечание: n – количество глаз

Таблица 2.

Содержание фукозы, оксипролина в гомогенате роговицы при травме в условиях экспериментальной коррекции, (М+m)

Группы животных

Содержание свободной фукозы, мкмоль/г

Содержание свободного оксипролина, мкмоль/г

1. Интактные животные(n=10)

2. Травма роговицы, эвтаназия на 7 сут.(n=10)

3. Травма роговицы, коррекция

глутаргином (n=30)

4. Травма роговицы, коррекция

тиотриазолином (n=20)

1,65+0,06

7,11+2,34

2,72+0,13

 

3,22+0,18

 

1,15+0,04

4,25+0,02

1,85+0,02

 

2,45+0,04

Статистический показатель

Р1-2<0,05
Р2-3<0,05
Р2-4<0,05

Р1-2<0,05
Р2-3<0,05
Р2-4<0,05

Примечание: n – количество глаз

Выводы:

1. Травматическое повреждение роговицы глаза способствует изменению NO – эргической системы и усиливает катаболизм коллагеновых и неколлагеновых белков стромы.

2. Глутаргин, как прекурсор оксида азота, предупреждает деполимеризацию коллагеновых белков и фукопротеидов стромы, а также нормализует NO – эргическую систему роговицы глаза при травме.

Литература:

  • 1. Боброва Н.Ф. Проникаюче поранення рогівки та способи його первинної хірургічної обробки / Н.Ф. Боброва, В.І. Шевчик // ХІІ з’їзд офтальмологів України. – 2010 – Одеса. – С.180 -182.
  • 2. Ванин А.Ф. Оксид азота в биологии: история, состояние и перспективы исследований / Ванин А.Ф. // Биохимия. – 1998. – Т. 63, № 7. – с. 867 - 869.
  • 3. Гундорова Р.А. Влияние газового потока, содержащего оксид азота на структуры гласного яблока (экспериментальное исследование) / Гундорова Р.А., Чеснокова А.Б., Шехтер А.Б. и [др.] // Весник офтальмологии. – 2001. – №4. – с.29 –32.
  • 4. Пасєчнікова Н.В. Офтальмологічна допомога населенню України в 2006 році / Пасєчнікова Н.В. // Офтальмол. журн. – 2007. - № 4. – С. 64-69.
  • 5. Тетянец С.С. Метод определения свободного оксипролина в сыворотке крови / С.С. Тетянец //Лабор.дело.-1985.-№1.-С.61-62.
  • 6. Шараев П.Н. Метод определения фукозы, не связанной с белками / П.Н. Шараев, Стрелков Н.С., Кильдиярова Р.Р. [и др.] // Клин. лабор. диагностики. – 1997. – №4. – С.17-18.
  • 7. Hevel J.M. Purification of the in ducible murene machrophage nitric oxide syntase / Hevel J.M. // J. Biol. Chem. – 1991. – V. 266, №34. – Р.22.
6.2
Ваша оценка: Нет Средняя: 6.2 (5 голосов)

интересное исследование

интересное исследование и актуальное на сегоднешний день.

Исследование является очень

Исследование является очень актуальным, учитывая, что это глаз - один из органов через которые мы получаем большую часть информации. Уточните, как идет восслановление эпителия, ведь соеденит -тканный компонент находится под ним. Восстановление меняет эстетический вид глаза?
Партнеры
 
 
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
Would you like to know all the news about GISAP project and be up to date of all news from GISAP? Register for free news right now and you will be receiving them on your e-mail right away as soon as they are published on GISAP portal.