facebook
twitter
vk
instagram
linkedin
google+
tumblr
akademia
youtube
skype
mendeley
Wiki
Global international scientific
analytical project
GISAP
GISAP logotip

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ В КОРРЕКЦИИ ХРОНИЧЕСКОЙ АЛКОГОЛЬНОЙ НЕФРОПАТИИ

Автор Доклада: 
Лазарев К.Л., Сатаева Т.П.
Награда: 
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ В КОРРЕКЦИИ ХРОНИЧЕСКОЙ АЛКОГОЛЬНОЙ НЕФРОПАТИИ

УДК 616.61+616.89-008.441.1

 

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ

ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ В КОРРЕКЦИИ ХРОНИЧЕСКОЙ АЛКОГОЛЬНОЙ НЕФРОПАТИИ


Лазарев Константин Леонидович, д-р мед. наук, проф.
 Сатаева Татьяна Павловна, аспирант

Крымский государственный медицинский университет им. С.И. Георгиевского
 

Процессы регенерации при алкогольной нефропатии существенно замедлены. Иммуномодулирующие низкомолекулярные природные препараты, активизирующие макрофаги с фенотипом, применяемые после отмены этанола для коррекции алкогольной нефропатии, оказывают выраженное положительное действие на ткани пораженной  этанолом почки. Препараты стимулируют процессы компенсаторной гипертрофии всех отделов нефрона, способствуют восстановлению фильтрационной функции почки путем нормализации стуктуры базальной мембраны и замедляют процессы склерозирования стромы органа.

Ключевые слова: макрофаги, алкоголь, почка, нефрэктомия, иммуномодуляторы.
The essential regeneration processes in alcohol nephropathy are significantly decreased. Natural immunomodulative drugs applied after withdrawal of 40% ethanol have a strong positive impact on the affected single kidney tissue. The drugs moderately activate the macrophages that stimulate the processes of compensatory hypertrophy in all nephron structures, restore the filtration function of the kidneys through the normalization of structures of the basal membrane and diminish the processes of stromal sclerosis.
Key words: macrophages, alcohol, kidney, nephrectomy, immunomodulative drugs.


Известно, что этиловый алкоголь и его метаболит - ацетальдегид и примеси оказывают непосредственное токси­ческое действие на почки [3, 4, 5]. Почечная форма хронической алкогольной болезни может быть представлена дистрофией и некрозом нефроцитов, гломерулонефритом и пиелонефритом.  Обсуждаемые механизмы патогенеза  алкогольной болезни почек, особенно развитие алкогольного хронического гломерулонефрита требуют дальнейшего экспериментального и клинико-морфологического уточнения. Помимо теоретического значения, изучение патогенеза алкогольной нефропатии важно в практическом аспекте для выбора адекватной терапии, которая может включать препараты для подавления синтеза гуморальных антител, антикоагулянты с целью улучшения микроциркуляции или  иммуномодуляторы в зависимости от формы поражения почек [1, 2, 6]. Целью настоящего исследования явилась оценка эффективности природных низкомолекулярных иммуномодуляторов класса «Эрбисол» в коррекции алкогольной нефропатии в эксперименте.


Материал и методы исследования


Для экспериментальных исследований были использованы 30 трехмесячных белых крыс (самцов и самок) массой 160-200 г, которые содержались в стандартных условиях согласно рекомендациям  И.П. Западнюка с соавт. Моделирование алкогольной нефропатии в единственной почке состояло в удаление левой почки при сохранении правой с послеоперационным экспериментальным созданием хронической алкогольной интоксикации по стандартной методике путем ежедневного одноразового внутрижелудочного зондового введения 40% этанола из расчета 0,015 мл 96% этилового спирта на 1 г массы тела животного. После 2-х месячной алкоголизации в течении 22-х суток вводились препараты Эрбисол и Экстра Эрбисол в минимальной дозировке 0,01мл на 10 г  массы тела животного по схеме (Таблица 1). Фармакологическая активность препаратов определяется содержанием в них низкомолекулярных биологически активных пептидов, активизирующих природные, эволюционно сформированные макрофагальные системы организма, ответственные за поиск и устранение патологических изменений. В качестве группы контроля использованы  16 беспородных крыс после нефрэктомии с 2-х месячной алкоголизацией 40% этанолом, которые в течении 22-х суток получали кипяченую воду.
Таблица 1
Схема применения препаратов Эрбисол и Экстра Эрбисол

         

 

Дни

 

Время

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

23

24

25

600-800

 

 

+

+

+

+

+

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

2100-2300

+

+

+

+

+

+

+

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Е

Препарат: + - Эрбисол Е - Экстра Эрбисол.

Морфологическое исследование единственной почки проводились на светооптическом уровне (окраски гематоксилин-эозин, бромфеноловый синий по А.В.Киселевой), на иммуногистохимическом уровне  (определение маркеров CD68, Ki67, αSMA), на электронномикроскопическом уровне (материал готовился по общепринятой методике).
Результаты и их обсуждение
После двухмесячной алкоголизации в единственной почке развиваются значительные патологические проявления. После двухмесячной алкоголизации 40% этанолом  с последующей отменой его и заменой на кипяченую воду в течение 22-х дней существенного восстановления структур почки не происходило. По-прежнему наблюдалось отставание в массе тела и оставшейся почки у подопытных животных (Таблица 2). Так масса животных в Эрбисол-группе (22 АЭр) практически не отличалась от нормы, тогда как  в группе контроля этот показатель был на 29,8% ниже.  Индекс гипертрофии в группе контроля (22КА), составил 0,616%, что на 0,231% ниже Эрбисол-группы, и свидетельствует о резком замедлении процессов компенсаторной и регенераторной гипертрофии.

Таблица 2

Масса животных

Масса правой почки, мг

Масса двух почек контроль, мг

Индекс гиперт-рофии, %

Индекс массы почек, %

Контроль

22АЭР

Контроль

22АЭР

Контроль

22АЭР

НОРМА

 

187,44±2,30

НОРМА

1050,12±8,1

1239,4±12,5

0,847

 

 

 

0,560

189,7±3,7

 

763,7±7,2

**

 

 

0,4025

22КА

*

22КА

 

 

0,616

 

146,1±1,5

763,82±8,1

**

0,523

Примечание к таблице  1: значимость отличий от контроля  - * - рк < 0,05;   ** - рк < 0,01; *** - рк < 0,001.


По данным светооптической микроскопии в группе без коррекции после отмены 40% этанола сохраняются явления  повышенной морфо-функциональной нагрузки отмечается сужение полости клубочка. Эпителий проксимальных канальцев имеет признаки гиалиново-капельной дистрофии. Просветы канальцев не одинаковы - часть сужена, а часть - расширена. В строме отмечались явления фиброгенеза. В просвете канальцев содержатся слабо эозинофильные массы с мелкодисперсным материалом, которые могут быть депозитами слущенного эпителия (рис. 1). При использовании препаратов «Эрбисол» и «Экстра Эрбисол» в  подопытной группе  на светооптическом  уровне определялись  наиболее интенсивные репаративные процессы клеток эпителия (рис.2). Отмечается  увеличение всех элементов отделов нефрона при относительном сужении просвета проксимальных и дистальных  канальцев.  В ряде клеток  канальцев сохраняются  элементы  клеточной дистрофии. 

 
Рис. 1. Уменьшение площади сосудистого клубочка, явления смешанной дистрофии эпителиоцитов в группе 22КА. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.: ок.10 х об.40


 Рис.2.  Состояние коркового вещества после проведенной иммуномодулирющей и репаративной коррекции. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.: ок.10 х об.40

На ультраструктурном уровне в группе без коррекции также отмечаются значительные изменения в эпителиоцитах проксимальных извитых канальцах и в окружающем их интерстиции. По данным электронной микроскопии отмечалась деструкция микроворсинок, их цитоплазма  была представлена мелкозернистым матриксом (рис. 3). В цитоплазме видны вакуоли и вакуолеподобные образования с аморфным и компактным материалом внутри них. Отмечается снижение количества микроворсинок на апикальной поверхности клетки и некоторое расширение межклеточных пространств. В просвете канальца белковые массы, десквамированные микроворсинки, фрагменты десквамированного эпителия. Базальная мембрана на отдельных участках неравномерно утолщена с большим количеством коллагеновых волокон под нею.

           
Рис. 3. Нефрэктомия с алкоголизацией 40% этанолом сроком 2 мес без коррекции. Ув.х 30000. Электронограмма


Рис. 4. Нефрэктомия с алкоголизацией 40% этанолом сроком 2 мес., коррекция Эрбисолом+Экстра Эрбисолом. Ув. х 4000. Электронограмма

По данным ультрамикроскопии  в Эрбисол-группе просвет  большинства дистальных канальцев был сужен, что свидетельствует о процессах компенсации. Ядра клеток с диффузно расположенным хроматином и формированием умеренно выраженных выпячиваний и инвагинаций. Между хорошо выраженными плазмалеммальними складками видно большое количество митохондрий с плотным матриксом. Отмечается расширение просвета полости клубочка, а также расширенные капилляры с наличием в их просвете форменных элементов крови.  Базальная мембрана утолщена на некоторых участках (рис. 4).
В группе контроля при исследовании  иммуногистохимических маркеров, в частности маркера митотической активности Кi67, была отмечена митотическая S-активность небольшой части регенерирующего эпителия, что наблюдалось, главным образом, в дистальных канальцах. Такая митотическая активность на фоне дистрофии, низкого индекса  массы почки, свидетельствует о напряженности процессов компенсаторной  гипертрофии (Рис. 5). Слабая  митотическая  активность и небольшое число регенерирующих эпителиоцитов  коррелировала с  низкой интенсивностью  синтеза белка  в эпителиоцитах (рис. 7). Причем содержание белка снижалось не только в цитоплазме эпителиоцитов, но и в интерстиции, что может быть следствием  окислительной модификации белков.

    
Рис. 6 . Иммунопозитвное окрашивание клеток на Кi67, 22КА.  Ув.: ок.10 х об.40


Рис. 6 . Иммунопозитвное окрашивание клеток на Кi67, 22АЭр .  Ув.: ок.10 х об.40

Индекс Кi67 в Эрбисол-группе достигал 25-30% , а в группе контроля 5-8% (рис. 6)..
Синтез белка в эпителиоцитах канальцев в этой же группе также достигает максимальной интенсивности (Рис.8).

 
Рис. 7. Угнетение синтеза белка в  эпителиоцитах с признаками дистрофии, с синтезом преимущественно кислых белков. Окраска БФС по Киселевой. Ув.:ок.10х об.100

Рис. 8. Усиление синтеза белка в эпителиоцитах извитых канальцев. Окраска БФС по Киселевой.
 Ув.: ок.10 х     об.100

Также, в отличие от группы контроля, несмотря на сохранение лимфоидно-клеточной инфильтрации, изменяется ее состав за счет  появления значительного числа макрофагов, которые активируются под влиянием препаратов класса «Эрбисол», локализуются  в местах наибольшего повреждения канальцев и, вероятно, стимулируют репарацию поврежденных эпителиоцитов (Рис. 9) В интерстиции возрастает количество миофибробластов веретеновидной формы, которые локализуются вокруг наиболее крупных канальцев, вероятно фиксируя базальную мембрану (Рис. 10).

 
Рис. 9 . Иммунопозитвное окрашивание клеток на CD68, серия 22АЭр.  Ув.: ок.10 х об.100

Рис. 10. Иммунопозитвное окрашивание клеток на αSMA, серия 22АЭр. Ув.: ок.10 х об.100.

Для изучения влияния алкоголя на обменные процессы опре­деляли биохимические маркеры свободнорадикального окисления  липидов и белков. Как показали исследования, белки сыворотки крови подвергались выраженной окислительной модификации, о чем свидетельствовали данные экспериментов. Так, превышение уровня токсичных продуктов окислительной модификации белков в контроле было на 77,02% больше, чем в норме (р < 0,001), а во второй -  на 54,05% ниже, чем в контроле (рк < 0,001), минимально превышая норму (Таблица 3). Уровень перекисного окисления липидов в контроле превышал норму на 74,32%, а при применении  Эрбисола и Экстра Эрбисола уровень ПОЛ был еще ниже (на 54,83%), чем в контроле (рк < 0,001).
Таблица 3

Показатели перекисного окисления липидов (ПОЛ) и окислительной модификации белков (ОМБ) сыворотки крови в контроле и в опыте

Сроки

(сутки)

К-во крыс

ПОЛ

(X±SX, мкмоль/л)

ОМБ

(X±SX, усл. ед.)

Норма

10

2,75 ± 0,79

0,17 ± 0,01

Контроль

6

10,71 ± 0,14

0,74 ± 0,07

Эрбисол + Экстра Эрбисол

6

4,86 ± 0,96111

0,34 ± 0,02111

Примечание к таблице: значимость отличий от контроля - 1 - рк < 0,05; 11 - рк < 0,01; 111 - рк < 0,001.


Выводы:
Алкогольная нефропатия сопровождается существенным замедлением процессов компенсаторной гипертрофии единственной почки и усилением процессов склерозирования тканей органа, а также усиление окислительного-восстановительного дисбаланса всего организма. Выбранные иммуномодулирующие и репарантные препараты оказывают выраженное позитивное воздействие на ткани пораженной почки, стимулируя процессы  гипертрофии отделов нефрона, равномерную васкуляризацию и нивелируя  процессы склероза стромы.

Литература:

  • 1. Guo C. J., Atochina-Vasserman E. N., Abramova H. et al. S-Nitrosylation of surfactantprotein-D controls inflammatory function.//PLoS Biology. –2004. - 6 (11).
  • 2. Martinez F. O., Sica A., Mantovani A. et al. Macrophage activation and polarization./Front Biosci.- 2008.- 13: 453?61рр.
  • 3. Галлемова С.А., Юраж М.В. Желудочно-кишечный тракт при острой и хронической алкогольной интоксикации // Российский медицинский журнал. – 2009. – №2. – С. 3–10.
  • 4.Мельников Ю.Л., Ольховик В.П. Некоторые аспекты метаболизма этанола при алкогольной интоксикации // Судебно-медицинская экспертиза. – 2008. – №3. – С. 37–39.
  • 5. Мещишен І.Ф., Пішак В.П. Обмін етанолу і біохімічні основи алкоголізму: Навчальний посібник. – Чернівці: Медінститут, 2004. – 53с.
  • 6. Моисеев В.С. Алкогольная болезнь. Поражения внутренних органов при алкоголизме. – М.: Б.и., 2009. – С. 3–129.
  • 7.Фесенкова В.Р., Драннік Г.М., Дріянська В.Є., Папакіна В.С., Ващенко С.М. Дослідження in vitro впливу препаратів Ербісол на продукцію інтерлейкіну-2 та γ-інтерферону Т-хелперами I типу здорових донорів // Лабораторна діагностика. - 2007. -№2. - С.37-40.
9.22917
Ваша оценка: Нет Средняя: 9.2 (48 голосов)

КСПЕРИМЕНТАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ПРИМЕНЕН

Уважаемые коллеги, возьму на себя смелость сделать несколько замечаний. 1. Дозы ЛС рассчитывают только мг/кг или мл/кг. 2.Всегда учитывают коэффициент видовой чувствительности. 3.Перед опытом животных рандомизируют. 4.Животные разного пола находятся в разных группах. Должно быть два контроля: самки и самцы. 5.Сравнивают прирост массы тела животных, массовые коэффициенты органов (в данном случае Мк почки). 6.Необходимо указывать какие статистические методы были использованы. С уважением, науч. сотр. отдела общей токсикологии Института фармакологии и токсикологии, к.б.н. Карацуба Татьяна Анатольевна.

Огромное всем спасибо за

Огромное всем спасибо за интерес к нашему научному труду!

Прекрасные иллюстрации!!!!!

Прекрасные иллюстрации!!!!!

Спасибо за оценку...

Спасибо за оценку...

Исследование очень

Исследование очень интересное. Вы брали оба пола, уточните пожалуйста соотношение их. И имеются ли различия или их нет в патологических признаках проявления нефропатии у животных разного пола или же после коррекции иммуномодулятором.?

Глубокоуважаемая Елена

Глубокоуважаемая Елена Николаевна, мы не разделяли экспериментальных животных в наших исследованиях по полу...

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ПРИМЕНЕ

На сегодняшний день это самая актульная тема не только среди взрослого населения, но и среди молодого и детского возраста. Алкоголь поражает не только почки,вызывая тяжелые заболевания, но и печень, легкие, сердце, головной мозг, подавляет условные рефлексы, человек теряет контроль над собой и не может вспомнить события, происходящие во время алкогольного затмения. Алкоголь суживает сосуды, нарушается их кровоснабжение, возможна гипоксия, в результате чего увеличиватся выброс ренина, что приводит к развитию почечной гипертонии. В связи с этим тема очень актуальна, отвечает сегодняшним требованиям и желательно продолжить исследования в этом направлени.

Коментарий

Спасибо за исключительно положительный комментарий. Да, это направление нами разрабатывается и дальше....

У нас есть препарат который положительно действует на печень

Константин Леонидович У нас есть препарат который положительно действует на печень . Можно его как то совместно с Вами испытать на животных. Мы из Севастополя. На токсичность он испытан на животных - и разрешен для применения . Зафиксировали его положительный эффект. Перед приемом - не происходит алкогольное отравление. Снимает симптомы алкогольного отравления, Врачи с которыми работали - говорят можете сказать специалистам что после приема повышется рН мочи до нормы, и улучшается работа печени. мой телефон 0677025134, и 0692942157
Партнеры
 
 
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
Would you like to know all the news about GISAP project and be up to date of all news from GISAP? Register for free news right now and you will be receiving them on your e-mail right away as soon as they are published on GISAP portal.