facebook
twitter
vk
instagram
linkedin
google+
tumblr
akademia
youtube
skype
mendeley
Wiki
Global international scientific
analytical project
GISAP
GISAP logotip
Перевод страницы
 

ПОВЫШЕНИЕ ЭКСПРЕССНОСТИ ДИАГНОСТИКИ НЕКОТОРЫХ ИНФЕКЦИЙ, ПЕРЕДАВАЕМЫХ ПОЛОВЫМ ПУТЕМ, С ПРИМЕНЕНИЕМ «ЭЛЕКТРОННОГО НОСА» НА ПЬЕЗОВЕСАХ

ПОВЫШЕНИЕ ЭКСПРЕССНОСТИ ДИАГНОСТИКИ НЕКОТОРЫХ ИНФЕКЦИЙ, ПЕРЕДАВАЕМЫХ ПОЛОВЫМ ПУТЕМ, С ПРИМЕНЕНИЕМ  «ЭЛЕКТРОННОГО НОСА» НА ПЬЕЗОВЕСАХ
Anastasiia Shuba

Воронежская государственная технологическая академия, Россия

Татьяна Кучменко, заведующий кафедрой, доктор химических наук, профессор

Воронежский государственный университет инженерных технологий, Россия

Игорь Тюркин, соискатель

Валерия Битюкова, профессор, доктор медицинских наук, профессор

Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко, Россия

Участник конференции

В работе обсуждается возможность повышения экспрессности и надежности диагностики инфекций, передаваемых половым путем, за счет применения массива пьезосорбционных сенсоров для детектирования газов-маркеров в равновесной газовой фазе над биопробами и дифференциации возбудителей.

Ключевые слова: инфекции, передаваемые половым путем, возбудители, газы-маркеры, идентификация, сенсоры, регрессия на главные компоненты.

It is discussed the possibility of increasing the rapidity and reliability of the sexually transmitted infections diagnosis by using an array of piezosensors for detecting gases-markers in the equilibrium gas phase above biomaterial and differentiation of pathogens.

Key words: sexually transmitted infections, pathogens, gases-markers, identification, sensors, regression on the principal components.

Проблема высокой заболеваемости инфекциями, передаваемыми половым путем (ИППП), остается актуальной во всем мире, несмотря на то, что за последние 5–7 лет в США, Западной Европе и России отмечается стойкая тенденция к снижению частоты их встречаемости в целом [1]. Сложность клинико-лабораторной диагностики бактериальных инфекций заключается в наличии одновременно 2–3 патогенных возбудителей и более, отсутствии, как правило, патогномоничных симптомов заболеваний, хотя в настоящее время созданы высокоэффективные тест-системы (ПЦР, ИФА). Однако, некоторые методы длительны (от 2 часов до 7-8 дней) и дороги из-за необходимости контроля оборудования, ингредиентов и привлечения квалифицированного персонала, постоянно обучающегося современным методикам диагностики [2]. Поэтому продолжается поиск новых методических подходов прямой и косвенной детекции возбудителей, в том числе разработка скрининг методов, позволяющих сократить временные и материальные затраты на диагностику.

Определенный род возбудителя выделяет в процессе жизнедеятельности различные классы органических соединений, в том числе легколетучих (газы-маркеры) (табл. 1), т.е. состав равновесной газовой фазы (РГФ) над образцом биоматериала (биопробой) может являться косвенным диагностическим признаком наличия возбудителя, что можно использовать для разработки скрининг метода по составу газов.

Таблица 1. Газы-маркеры некоторых возбудителей ИППП [1-4]

 
Диагностическая оценкаХарактеристика запахаГазы-маркеры в РГФ
НормаНетОксикислоты
КандидозДрожжевойОдноатомные спирты, карбоновые кислоты
ГарднереллезРыбныйАлифатические амины, изонитрилы
ХламидиозНетОдноатомные спирты, аммиак
ТрихомониазНеприятныйАлифатические и ароматические амины
МикроплазмозНетНе установлены
Уреаплазмоз НетНе установлены

Наиболее распространенным подходом для анализа газовой фазы сложного многокомпонентного состава с возможностью классификации и детерминации образцов является использование мультисенсорных приборов, в том числе на основе пьезокварцевых резонаторов, с искусственным интеллектом типа «электронный нос» [5].

Цель исследования – разработка экспрессного способа диагностики наиболее распространенных инфекций, передаваемых половым путем, с применением мультисенсорной системы на основе 8 микрогравиметрических сенсоров (пьезовесов).

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

В качестве объектов исследования выбраны пробы цервикальной слизи здоровых пациенток и с различными моноинфекциями (кандидоз, хламидиоз, гарднереллез, уреаплазмоз, вирус папилломы человека) или их сочетаниями – микст-инфекцией; кроме этого для обучения сенсорной системы выбраны индивидуальные тест-вещества, которые по литературным данным могут служить газами-маркерами инфекций – первичные, вторичные и третичные амины с алкильными и арильными радикалами, уксусная и масляная кислоты марки «ч.д.а». Предварительная классификация 83 биопроб на 2 группы «больные» (38 проб), «условно здоровые» (45 проб) проводилась по результатам стандартных методов диагностики (ПЦР, микроскопия мазка, ИФА) (биоматериал и результаты лабораторных клинических анализов предоставлены сетью клиник «Медлайн», Воронеж). Отбор проб осуществляли специалисты клиник, помещали в стерильные пробирки с притертыми полистирольными крышками. Пробирки выдерживали при температуре 20 ± 2°С в течение 15 – 30 мин (время выдержки проб t, с).

Исследовали состав равновесной газовой фазы над биопробами и индивидуальными тест-веществами объемом 1 см3 при 20 ± 2 ºC в статическом режиме на анализаторе газов «МАG-8» (ООО «СенТех», Воронеж) со специальным программным обеспечением «МАG-Soft». Во время измерения в программе фиксировали выходные сигналы восьми сенсоров, относительные изменения частотных характеристик каждого сенсора с шагом в 1 с в виде хроночастотограмм, аналитические сигналы (?Fmax,i, Гц), площадь (Sв.о., Гц•с) и степень идентичности «визуальных отпечатков» [6].

Сенсоры для анализа индивидуальных тест-веществ и РГФ над цервикальной слизью изготавливали на основе пьезоэлектрических кварцевых резонаторов ОАВ-типа (пьезовесы) путем нанесения на их электроды пленок различных по свойствам сорбентов. Подготовку сенсоров осуществляли по описанной ранее методике [7]. В качестве оптимальных выбраны пленки, проявляющие селективность к выбранным газам-маркерам, стабильные, с низким уровнем шумов [8]: полиэтиленгликоль 2000 (ПЭГ-2000 – сенсор 1), углеродные нанотрубки (УНТ – сенсор 2), дициклогексан-18-краун-6 (ДЦГ-18-К-6 – сенсор 3), тритон Х-100 (ТХ-100 – сенсор 4), бромкрезоловый синий (БКС – сенсор 5), метиловый красный (МК – сенсор 6), пчелиный воск (ПчВ – сенсор 7), полиэтиленгликоль адипинат (ПЭГА – сенсор 8).

Для оценки эффективности сорбции паров тест-веществ на пленках сорбентов и идентификации отдельных веществ в смеси выбраны массовая чувствительность Sm (Гц•м3/г) и параметр эффективности сорбции Amaxij, рассчитываемые по формулам:

Sm = ?Fmax,i/с ;
Amaxij= ?Fmax,i/?Fmax,j ,
где ?Fmax,i(j) – аналитический сигнал i-того (j-того) сенсора в массиве, Гц,
с – концентрация тест-вещества в ячейке детектирования, г/м3.

Обработка данных по методу регрессии на главные компоненты выполнена в программе The Unscrumbler X (v.10.0.0, CAMO Softwear). В качестве алгоритма проверки калибровки выбран метод тестового набора.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Для обеспечения достоверности диагностических мероприятий необходимо решить две принципиальные задачи. Первое, доказать специфичность детектирования возбудителей моноинфекций по их газам-маркерам, что тесно связано со второй задачей – правильным подбором покрытий сенсоров, обеспечивающих селективность и чувствительность микровзвешивания классов соединений или конкретных веществ в РГФ над биопробой. Поэтому для детектирования газов-маркеров выбраны пленки разных по свойствам сорбентов, но с заметным сродством к определяемым группам соединений (табл. 2).

Сорбаты

Сорбенты

ПЭГ-

2000

УНТ

ДЦГ-

18-К-6

ТХ-100БКСМКПчВПЭГА
Таблица 2. Массовая чувствительность (Sm, Гц•м3/г) сенсоров с пленками различных сорбентов к парам тест-веществ
Триэтиламин1.6·10-15.2·10-14.7·10-11.5020.02.901.6·10-11.90
2,4-Диметиланилин27.020.087.052.017.020.010.087.0
Бензиламин17.063.01.60·1021.40·10257.034.048.02.70·102
Пиперидин3.006.7028.030.043.01.70·1025.5040.0
Циклогексиламин4.4014.023.034.044.022.05.0065.0
Аммиак4.4·10-18.8·10-11.801.202.204.7·10-14.4·10-13.50
Уксусная кислота68.021.01.70·10268.097.055.010.094.0
Масляная кислота28.017.078.028.037.017.011.041.0
Вода6.402.5012.09.403.002.500.997.90

Установлены максимальные значения массовой чувствительности для каждого тест-вещества, на основании которых выбраны оптимальные пленки модификаторов электродов пьезокварцевых резонаторов для детектирования газов-маркеров в РГФ над биопробами. Так, например, для определения легколетучих органических кислот рекомендуется использовать пленки ДЦГ-18-К-6 и ПЭГ-2000, для определения алифатических аминов – БКС, МК и ПЭГА. Для пленок УНТ, ПчВ и ТХ-100 характерна высокая чувствительность к выбранным веществам, и они необходимы для дифференциации состава смесей.

В качестве информативных данных мультисенсорной системы в программном обеспечении “MAG-Soft” при анализе состава равновесной газовой фазы над объектом применяются «визуальные отпечатки» в двух вариантах: по максимальным сигналам всех сенсоров в матрице («визуальные отпечатки» максимумов) и по сигналам сенсоров, регистрируемых в определенные моменты измерения (кинетические «визуальные отпечатки») (рис. 1). Геометрические особенности «визуальных отпечатков» (форма, площадь фигуры) определяются качественным и количественным (соотношение содержаний и концентрация отдельных соединений) составом РГФ над анализируемыми пробами. При анализе биопроб в РГФ находятся микроколичества газов-маркеров, особенности взаимодействия которых с пленками сорбентов в большей степени проявляются во временном развитии процесса и, как следствие, на кинетических «визуальных отпечатках».

Установлено, что по форме кинетических «визуальных отпечатков» для всех проб можно выделить несколько групп (рис. 1). Степень идентичности «визуальных отпечатков», рассчитанная в программе “MAG-Soft”, между группами составляет 38 – 72 %, внутри групп – от 73 до 89 %. Выделение образцов в группы хорошо коррелирует с классификацией проб по результатам традиционных методов анализа и природой инфекции, возбудителя.

Присутствие возбудителей инфекций или кокковых грибков может вызывать сходные нарушения в микрофлоре цервикального канала, вследствие чего «визуальные отпечатки» над биопробами становятся похожими. Поэтому степень идентичности кинетических «визуальных отпечатков» для групп с различными заболеваниями в некоторых случаях достигает 85 %. По значению площади «визуального отпечатка» надежно можно выделить только пробы из группы «пролеченные».

Рис. 1. Кинетические «визуальные отпечатки» откликов массива сенсоров в РГФ над биопробами. По вертикальной оси отложены отклики сенсоров (?F, Гц) в определенный момент времени, по круговой оси – время фиксирования сигналов (?, с).

Таким образом, по геометрии и площади кинетических «визуальных отпечатков» невозможно надежно идентифицировать моноинфекции. Для получения экспрессной диагностической информации о наличии в пробе возбудителей инфекций использованы параметры для идентификации в РГФ отдельных газов-маркеров заболеваний.

Установлено, что в РГФ над биопробами, отнесенными к группам «гарднереллез», «кандидоз», «хламидиоз» по результатам анализа стандартными методами, по параметрам , , идентифицированы триэтиламин, уксусная кислота, аммиак соответственно (табл. 3), что согласуется с литературными данными [1-4]. Для возбудителей уреаплазмоза, микоплазмоза, вируса папилломы человека не установлены газы-маркеры, поэтому с помощью параметров невозможно диагностировать эти заболевания.

Для получения большей информации о наличии возбудителей ИППП использовали метод регрессии на главные компоненты, который относится к методам многомерной калибровки и используется для классификации образцов по предварительно построенной в процессе обучения модели [9].

Номера пробИдентификационные параметрыИдентифицируемое соединение  Результаты идентификацииПредпо-лагаемая инфекцияСовпадение с традиционными методами
Таблица 3. Результаты определения наличия возбудителя в биопробах по идентификационным параметрам Amaxij
8, 22, 28, 34, 35, 46 ТриэтиламинПрисутствует ГарднереллезСовпадает
 Уксусная кислотаНе присутствует
 АммиакНе присутствует
1-3,10, 24, 25, 41, 51, 60, 62, 63, 70, 72, 78, 80 ТриэтиламинНе присутствуетКандидозСовпадает
 Уксусная кислотаПрисутствует
 АммиакНе присутствует
15,17, 21, 23, 73, 74, 83 ТриэтиламинНе присутствуетКандидозНе совпадает
 Уксусная кислотаПрисутствует
 АммиакНе присутствует
20, 47, 56, 75, 81 ТриэтиламинНе присутствуетХламидиозСовпадает
 Уксусная кислота Не присут ствует
 АммиакПрисутствует
4, 14, 16, 18, 36, 37, 43, 52, 53, 59, 69, 82 ТриэтиламинНе присутствуетОтсутствуетНе совпадает
 Уксусная кислотаНе присутствует
 АммиакНе присутствует
5, 7, 9, 11-13, 26, 27, 29-33, 38-40, 44, 45, 48, 49, 50, 54, 55, 57, 58, 64-68, 76, 77, 79 ТриэтиламинНе присутствуетОтсутствует Совпадает
 Уксусная кислотаНе присутствует
 АммиакНе присутствует

Для экспресс-оценки наличия возбудителя в цервикальной слизи выбран фактор с маркером «здоровые», который кодировали значениями «+1» в присутствии и «-1» без диагностируемых инфекций по результатам стандартных методов анализа проб (референтные значения).

Для обучения были взяты результаты анализа (идентификационные параметры , ?Fmax,i, Sв.о., t) для представительного набора из 19 биопроб, с алгоритмом проверки правильности методом тестового набора. С помощью полученной модели можно выделить группы «здоровые» и «больные» с погрешностью не более 10% (выделены областями, рис.2).

Рис. 2. Графики счетов, полученных методом регрессии на главные компоненты, для биопроб с использованием оптимального числа переменных.

Для оценки адекватности и возможности использования оптимизированной регрессионной модели в медицинских лабораториях ее применили для обработки массива данных для 64 биопроб (№ 20 – 83 в табл.3). Прогнозированные значения фактора «здоровые» для этих проб по модели являются значимыми и хорошо согласуются с референтными. Процент совпадения результатов, полученных по модели, с результатами микроскопии мазка составляет 97 %, ИФА, ПЦР-анализа – 93 %.
Таким образом, полученная регрессионная модель является адекватной для скрининга и ее возможно использовать для ранжирования проб на группы «здоровые» и «больные». Использование регрессионной модели для обработки результатов анализа РГФ над цервикальной слизью массивом из 8 микрогравиметрических сенсоров позволяет высокоспецифично получить экспрессную (не более 30 мин) диагностическую информацию о наличии возбудителя ИППП.

Литература:

  1. Халдин А.А. // Инфекции и антимикробная терапия. 2004. Т. 6. № 3.
  2. Дмитриев Г.А. // Инфекции и антимикробная терапия. 2003. Т. 05. № 1.
  3. Morgan, S.L., Fox A., Gilbart J. // J. Microbiol. Methods. 1989. V. 9. P. 57.
  4. Chen K.C.S., Forsyth P.S., Buchanan T.M., et al. // J Clin Invest. 1979. V.63. P.828.
  5. Проблемы аналитической химии Т. 14: Химические сенсоры / Под ред. Ю.Г. Власова. М.: Наука, 2011. 399 с.
  6. Кучменко Т.А. Инновационные решения в аналитическом контроле: учеб пособие. Воронеж: Воронеж. гос. технол. акад., ООО «СенТех», 2009. 252 с.
  7. Кучменко Т.А., Мишина А.А. // Журнал аналит. химии. 2011. Т. 66. № 8. С. 816.
  8. Кучменко Т.А., Шуба А.А., Бельских Н.В. // Аналитика и контроль. 2012. Т. 16. № 2. С. 151.
  9. Эсбенсен К. Анализ многомерных данных. Избранные главы / Пер. с англ. С.В. Кучерявского; Под ред. О.Е. Родионовой. Черноголовка: Изд-во ИПХФ РАН, 2005. 160 с.
Комментарии: 13

Чичкова Марина Александровна

Тема исследования актуальна. Экспресс-методики всегда заслуживают пристального внимания и активного применения. Дальнейших творческих успехов!

Kondrashev Sergey Alexandrovich

Уважаемые коллеги! Ваше исследование, безусловно, заслуживает высокой оценки. Сама идея использования сенсорного прибора с искусственным интеллектом для детекции, пусть и по косвенному признаку, инфекционного агента замечательна. Желаю дальнейших творческих успехов, а также скорейшего внедрения Ваших разработок в повседневную практику здравоохранения. Сергей Кондрашев.

Лахтин Юрий Владимирович

Пионерская работа, заслуживающая внимания. Безусловно, требуются дальнейшие исследования ввиду сложности и малоизученности микробиоценоза. А если учесть, что в биопленках разных биотопов бактериальные клетки, как правило, находятся в ассоциативном виде, то промежуточные или конечные их метаболиты могут коренным образом менять газы-маркеры для их детекции. Данное исследование лишний раз подтверждает важность и необходимость интегративного подхода разных специалистов к изучению проблем медицины. Поле научной деятельности по данному вопросу - целинное. Желаю авторскому коллективу дальнейших успехов в изучении этой интересной проблемы. С уважением, Ю.В. Лахтин.

Stepanov Yuriy Mironovich

Благодарность авторам за новизну и инновационный подход в определении ИППП.Необычайно сложно определить "запах нормы или здоровья", т.к. в организме несколько сот видов живых микроорганизмов и их количественные взаимотношения, спектр продуктов метаболизма, вторично синтезируемых веществ, регуляторных факторов ит.д огромен.При патологии -миксты инфекций,вирусов,простейших, их синергизм и антагонизм...И определять ИППП при помощи пьезосорбционных сенсоров для детектирования газов-маркеров необычайно сложно и интересно.Желаю Вам успешного преодоления возникающих проблем по доработке и внедрению данного метода. С уважением, В.Диденко. vladdidenko23@gmail.com

Stepanov Yuriy Mironovich

Исследование очень актуально и должно широко внедряться! Успехов! Крылова елена

Kamishnikova Ludmila Aleksandrovna

Исследование очень актуально для скрининга пациентов. Дальнейших Вам успехов в работе и скорейшего внедрения и распространения в практике!

Вокина Вера Александровна

интересное исследование.Уточните, пожалуйста, при наличии сопутствующих заболеваний (не инфекционных) изменяются ли исследуемые Вами показатели? На каком этапе находится практическое применение данного метода?

Шуба Анастасия Александровна

Главной задачей была детекция инфекционных заболеваний, а рассмотрение сопутствующих патологий не проводилось. Хотя, безусловно, это заслуживает внимания. На данный момент проводится исследование и набор статистической информации по надёжности и специфичности данного метода. Спасибо за внимание к работе. С уважением, авторский коллектив.

Морозова Елена Николаевна

Разработка интересная с достаточным количеством проработанного материала. Конечно хочеться пожелать успешного и широкого внедрения ее в клиническую практику. Интересно, насколько экономически доступен для региональных лабораторий этот прибор?

Шуба Анастасия Александровна

Стоимость экспериментального образца данного прибора около 200 000 рублей. После доработки методики и введение на рынок его стоимость естественно снизится. Мы считаем, что такой прибор вполне доступен для заведений здравоохранения.

Агарвал Раджеш

Тема исследования очень актуальна, тем более, что снижение заболеваемости инфекциями, передаваемыми половым путем не так существенно

Fateev Ivan Nikolaevich

Тема исследования очень актуальна, тем более, что снижение заболеваемости инфекциями, передаваемыми половым путем не так существенно. К сожалению не удается просмотреть рисунки. Они не загружаются.

Шуба Анастасия Александровна

Уважаемый Иван Николаевич, к сожалению не смогла исправить ситуацию с рисунками, но могу вам выслать полную версию статьи вместе с рисунками на почту.
Комментарии: 13

Чичкова Марина Александровна

Тема исследования актуальна. Экспресс-методики всегда заслуживают пристального внимания и активного применения. Дальнейших творческих успехов!

Kondrashev Sergey Alexandrovich

Уважаемые коллеги! Ваше исследование, безусловно, заслуживает высокой оценки. Сама идея использования сенсорного прибора с искусственным интеллектом для детекции, пусть и по косвенному признаку, инфекционного агента замечательна. Желаю дальнейших творческих успехов, а также скорейшего внедрения Ваших разработок в повседневную практику здравоохранения. Сергей Кондрашев.

Лахтин Юрий Владимирович

Пионерская работа, заслуживающая внимания. Безусловно, требуются дальнейшие исследования ввиду сложности и малоизученности микробиоценоза. А если учесть, что в биопленках разных биотопов бактериальные клетки, как правило, находятся в ассоциативном виде, то промежуточные или конечные их метаболиты могут коренным образом менять газы-маркеры для их детекции. Данное исследование лишний раз подтверждает важность и необходимость интегративного подхода разных специалистов к изучению проблем медицины. Поле научной деятельности по данному вопросу - целинное. Желаю авторскому коллективу дальнейших успехов в изучении этой интересной проблемы. С уважением, Ю.В. Лахтин.

Stepanov Yuriy Mironovich

Благодарность авторам за новизну и инновационный подход в определении ИППП.Необычайно сложно определить "запах нормы или здоровья", т.к. в организме несколько сот видов живых микроорганизмов и их количественные взаимотношения, спектр продуктов метаболизма, вторично синтезируемых веществ, регуляторных факторов ит.д огромен.При патологии -миксты инфекций,вирусов,простейших, их синергизм и антагонизм...И определять ИППП при помощи пьезосорбционных сенсоров для детектирования газов-маркеров необычайно сложно и интересно.Желаю Вам успешного преодоления возникающих проблем по доработке и внедрению данного метода. С уважением, В.Диденко. vladdidenko23@gmail.com

Stepanov Yuriy Mironovich

Исследование очень актуально и должно широко внедряться! Успехов! Крылова елена

Kamishnikova Ludmila Aleksandrovna

Исследование очень актуально для скрининга пациентов. Дальнейших Вам успехов в работе и скорейшего внедрения и распространения в практике!

Вокина Вера Александровна

интересное исследование.Уточните, пожалуйста, при наличии сопутствующих заболеваний (не инфекционных) изменяются ли исследуемые Вами показатели? На каком этапе находится практическое применение данного метода?

Шуба Анастасия Александровна

Главной задачей была детекция инфекционных заболеваний, а рассмотрение сопутствующих патологий не проводилось. Хотя, безусловно, это заслуживает внимания. На данный момент проводится исследование и набор статистической информации по надёжности и специфичности данного метода. Спасибо за внимание к работе. С уважением, авторский коллектив.

Морозова Елена Николаевна

Разработка интересная с достаточным количеством проработанного материала. Конечно хочеться пожелать успешного и широкого внедрения ее в клиническую практику. Интересно, насколько экономически доступен для региональных лабораторий этот прибор?

Шуба Анастасия Александровна

Стоимость экспериментального образца данного прибора около 200 000 рублей. После доработки методики и введение на рынок его стоимость естественно снизится. Мы считаем, что такой прибор вполне доступен для заведений здравоохранения.

Агарвал Раджеш

Тема исследования очень актуальна, тем более, что снижение заболеваемости инфекциями, передаваемыми половым путем не так существенно

Fateev Ivan Nikolaevich

Тема исследования очень актуальна, тем более, что снижение заболеваемости инфекциями, передаваемыми половым путем не так существенно. К сожалению не удается просмотреть рисунки. Они не загружаются.

Шуба Анастасия Александровна

Уважаемый Иван Николаевич, к сожалению не смогла исправить ситуацию с рисунками, но могу вам выслать полную версию статьи вместе с рисунками на почту.
Партнеры
 
 
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
Would you like to know all the news about GISAP project and be up to date of all news from GISAP? Register for free news right now and you will be receiving them on your e-mail right away as soon as they are published on GISAP portal.