facebook
twitter
vk
instagram
linkedin
google+
tumblr
akademia
youtube
skype
mendeley
Page translation
 

ОСОБЕННОСТИ СТРОЕНИЯ ПЕЙЕРОВЫХ БЛЯШЕК ТОНКОЙ КИШКИ КРЫС ПОСЛЕ КОРРЕКЦИИ ЦИКЛОФОСФАН-ИНДУЦИРОВАННОЙ ИММУНОСУПРЕССИИ С ПОМОЩЬЮ ИМУНОФАНА

ОСОБЕННОСТИ СТРОЕНИЯ ПЕЙЕРОВЫХ БЛЯШЕК ТОНКОЙ КИШКИ КРЫС ПОСЛЕ КОРРЕКЦИИ ЦИКЛОФОСФАН-ИНДУЦИРОВАННОЙ ИММУНОСУПРЕССИИ С ПОМОЩЬЮ ИМУНОФАНА
Kashchenko Svetlana, doctor of medicine, full professor

Morozova Elena, postgraduate student

Morozov Vitaliy, postgraduate student

Lugansk State Medical University, Ukraine

Championship participant: the National Research Analytics Championship - "Ukraine";

the Open European-Asian Research Analytics Championship;

УДК 612.017.1:616-092.9

Изучены особенности строения пейеровых бляшек тонкой кишки крыс после коррекции имунофаном циклофосфан-индуцированной иммуносупрессии. Выявлено, что к 30 суткам происходит нивелирование действия цитостатического препарата, а это может свидетельствовать об эффективности использования имунофана в качестве корректора.

Ключевые слова:пейеровы бляшки, тонкая кишка, крысы, имунофан, циклофосфан

Structure of small intestine peyer’s patches of rats after imunofan correction cyclophosphamide-induction immusupression were studied. Showed, that influence of the cytostatic drud are disappeared to 30 days and it can be result of the effective influence of the imunofan as a corrector.

Keywords: peyer’s patches, small intestine, rats, imunofan, cyclophosphamide

 

Учитывая, что органы иммунной системы достигают максимальной массы в молодом возрасте и относительно рано подвергаются возрастной инволюции, патологические процессы в них возникают преимущественно у лиц детского и трудоспособного возраста, что приводит к социальным и экономическим проблемам во всех странах мира [2, 3]. Поэтому фармацевтическая промышленность, активно разрабатывает лекарственные формы для коррекции заболеваний иммунной системы [1]. На современном этапе существуют три группы препаратов, которые используются в клинической практике: иммуносупрессоры, иммуностимуляторы и иммуномодуляторы [1, 4]. С целью безопасности для здоровья человека, применение препаратов каждой группы имеет строгие показания, а эффективность их использования должна подтверждаться изучением состояния органов-мишеней на макроскопическом, микроскопическом и ультрамикроскопическом уровнях. Среди препаратов иммунодепрессивного действия широкое распространение получил циклофосфан, который входит во многие схемы противоопухолевой терапии, используется для профилактики отторжения трансплантантов, а также для лечения аутоиммунных заболеваний [6]. Ингибирование функциональной активности клеток иммунной системы является одной из главных причин токсического действия циклофосфана, поэтому проблема снижения его побочных действий является весьма актуальной [5].

Одним из путей повышения эффективности лечения онкологических и других заболеваний с помощью химиотерапевтических препаратов является их комбинирование с иммуномодуляторами. Тимическим препаратом последнего поколения, который широко используется с целью коррекции иммунодефицитных состояний в клинической практике, является имунофан [4]. Поэтому целью исследования явилось изучение особенности строения пейеровых бляшек тонкой кишки крыс после коррекции циклофосфан-индуцированной иммуносупрессии с помощью имунофана.

Работа является частью научно-исследовательской работы кафедры гистологии, цитологии и эмбриологии ГЗ «Луганский государственный медицинский университет»: «Особливості будови органів імунної та ендокринної систем при імуностимуляції та імуносупресії»(державний реєстраціїний номер 0112U000096)

Материалы и методы. Исследование проводили на 60 белых беспородных половозрелых крысах-самцахмассой 210-250 г. Животные были разделены на две группы по 36 и 24 в каждой. В Iгруппу входили крысы, материал которых использовали для микроскопического исследования,воIIдля ультрамикроскопического исследования. Всем животным вводили циклофосфан однократно внутримышечно в дозе 200 мг/кг, а затем имунофан по схеме на 2, 4, 6, 8, 10 сутки эксперимента в дозе 0,7 мкг/кг массы тела, контролем служили интактные крысы. Животных Iгруппы выводили из эксперимента на 7, 30, 90 сутки после завершения введения препаратов под эфирным наркозом. Выделяли тонкую кишку. Фиксировалиее в 10% растворе формалина, затем подвергали стандартной гистологической проводке. Срезы толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилин-эозином. При помощи автоматизированного морфометрического комплекса (световой микроскоп OlympusCX41, цифровая фотокамера и персональный компьютер с набором прикладных программ), подсчитывали количество ядер на единицу площади препарата (1000 мкм2) в куполе, герминативном центре и периферической зоне лимфатических узелков, а также в межузелковой зоне пейеровых бляшек.Животных IIгруппывыводили из эксперимента на 7 и 30 сутки после окончания введения имунофана. Сразу после извлечения тонкой кишки выделяли кусочки пейеровых бляшек объемом 1 мм3. Обработку материала осуществляли по стандартной методике. Ультратонкие срезы контрастировали в растворе уранилацетата и цитрата свинца по E. Reynolds и изучали под электронным микроскопом с дальнейшим фотографированием [7]. Обработку цифровых данных проводили с помощью программы «Statistica» (определяли t-критерий Стьюдента, достоверными считали отличия с уровнем значимости при p<0,05).

Результаты и их обсуждение. У половозрелых крыс длина тонкой кишки достоверно не изменялась на 7, 30 и 90 сутки по сравнению с контрольными показателями (рис. 1). Пейеровы бляшки располагались в стенке органа на его свободном крае.

Рис. 1. Тонкая кишка с пейеровыми бляшками (А) и участок толстой (Б) кишки половозрелых крыс на 7 сутки после введения имунофана.

На гистологических препаратах бляшки представляли собой скопления лимфатических узелков и расположенных между ними межузелковых зон.

На 7, 30 сутки у половозрелых крыс количество ядер клеток на единицу площади препарата превышали контрольные значения (табл. 1) в области купола (12,77%, 20,59%), периферической зоны (8,86%, 5,48%), герминативного центра (10,77%, 7,35%) и межузелковой зоны (14,81%, 32,00%) (рис. 2, 3). На 90 сутки наблюденияданные разных зон пейеровых бляшек тонкой кишкиприближались к контрольнымпараметрам.

Таблица 1

Количество ядер клеток на 1000 мкм2 в разных зонах лимфатических узелков пейеровых бляшек тонкой кишки у половозрелых животных интактной и экспериментальной групп в разные сроки наблюдения после воздействия имунофаном M+m (n=24)

Зоны лимфатических узелков

Половозрелые крысы

7 сутки

30 сутки

90 сутки

Экспери-

мент

Конт-

роль

Экспери-

мент

Конт-

роль

Экспери-

мент

Конт-

роль

Купол

0,53+0,03*

0,47+0,01

0,68+0,03*

0,60+0,01

0,61+0,02

0,60+0,02

Герминатив-

ный центр

0,79+0,03*

0,72+0,01

0,77+0,02

0,73+0,03

0,61+0,03

0,61+0,02

Перифери-

ческая зона

0,59+0,02

0,53+0,02

0,73+0,03*

0,68+0,02

0,73+0,03

0,71+0,02

Межузелковая зона

0,54+0,01*

0,46+0,03

0,66+0,02*

0,50+0,02

0,47+0,02

0,45+0,02

Примечание: *- достоверные отличия от контрольных данных при p<0,05.

При ультрамикроскопическом исследовании на 7 сутки наблюдения после коррекции иммуносупрессии с помощью имунофана выявляются клетки с явления апоптоза, а также некроза. В макрофагах содержится умеренное количество лизосом. М-клетки имеют типичное строение. Между лимфоцитами на электронных микрофотографиях располагается соединительная ткань.

Рис. 2. Купол лимфатического узелка половозрелых крыс на 30 сутки после коррекции иммуносупрессии с помощью имунофана: 1, 2, 3 – малый, средний, большой лимфоциты, 4 – интраэпителиальный лимфоцит, 5 – ретикулоцит, 6 – макрофаг, 7 – эпителиоцит. Окраска: гематоксилин-эозин. Приближение: Zoom 132. Объектив: Plan C N 60x/0.25∞/-/FN22.

Рис. 3. Межузелковая зона пейеровой бляшки половозрелых крыс на 30 сутки после коррекции иммуносупрессии с помощью имунофана: 1, 2, 3 – малый, средний, большой лимфоциты, 4 – макрофаг. Окраска: гематоксилин-эозин. Приближение: Zoom 132. Объектив: Plan C N 60x/0.25∞/-/FN22.

Встречаются единичные клетки с фигурами митоза (рис. 4). К 30 суткам наблюдения выявляются клетки с явлениями апоптоза, лимфоциты плотно прилежат друг к другу, макрофаги содержат большое количество лизосом. М-клетки морфологически не отличаются от таковых в контрольной группе. Увеличивается количество лимфобластов и клеток с фигурами митоза.

Рис. 4.Участок пейеровой бляшки тонкой кишки половозрелых крыс на 30 сутки после коррекции иммуносупрессии с помощьюимунофана: а – клетка с картиной митоза (КМ), б – М-клетка(Мк), в – лимфоциты (Л), г – макрофаг (М) с вторичными лизосомами в цитоплазме (ВЛ). Увеличение × 12000.

Выводы.

  1. После коррекции иммуносупрессии при помощи имунофана количество ядер клеток во всех зонах пейеровых бляшек половозрелых крыс на 7 и 30 сутки наблюдения превышает контрольные данные, что может свидетельствовать о способности иммуномодулятора нивелировать негативное действие циклофосфана.
  2. При ультрамикроскопическом исследовании пейеровых бляшек тонкой кишки после использования имунофана на фоне введения высокой дозы циклофосфана на 7 сутки проявляется иммуносупрессивние действие цитостатика, а к 30 суткам происходит нивелирование его действия после воздействия иммуномодулятора.
  3. К 90 суткам наблюдения результаты микроскопического исследования приближаются к контрольным параметрам, что свидетельствует о способности пейеровых бляшек адаптироваться к действию имунофана и циклофосфана.

 

Литература:

  1. Бибик Е. Ю. Современные возможности медикаментозной коррекции морфогенеза органов иммунной системы / Е. Ю. Бибик, Е. В. Куцкая // Український медичний альманах. – 2005. – Т. 8, № 4. – С. 207–212.
  2. Закономерности вариабельности лимфоидных структур периферического звена иммунной системы / В. К. Сырцов, В. М. Евтушенко, С. П. Ковалев [и др.] // Вісник проблем біології і медицини. – 2003. – Вип. 3. – С. 87–88.
  3. Лабунець І. Ф. Вікові зміни циркадних і циркануальних коливань величини імунної відповіді та числа клітин у лімфоїдних органах тварин: можливий зв’язок з факторами тимуса / І. Ф. Лабунець // Фізіол. журн. – 2001. – Т. 47, № 5. – С. 54–62.
  4. Лебедев В. В. Гидрофильный гексапептид имунофан – гиперактивный регулятор транспортных белков множественной лекарственной устойчивости / В. В. Лебедев, С. А. Новиков // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2006. – Т. 142, № 12. – С. 649–652.
  5. Cyclophosphamide enhances immunity by modulating the balance of dendritic cell subsets in lymphoid organs / T. Nakahara, H. Uchi, A. M. Lesokhin [et al.] // Blood. – 2010. – V. 115, № 22. – P. 4384–4392.
  6. High-dose cyclophosphamide for moderate to severe refractory multiple sclerosis / D. E. Gladstone, K. W. Zamkoff, L. Krupp [et al.] // Arch. Neurol. – 2006. – V. 63, № 10. – P. 1388–1393.
  7. Reynolds E. S. The use of lead citrate at high pH as an electron-opaque stain in electron microscopy / E. S. Reynolds // Journal of cell biology. – 1963. – № 17. – P. 208–212.
0
Your rating: None Average: 6.9 (7 votes)
Comments: 9

Chichkova Marina

Проведена интересная экспериментальная работа. При дальнейшем продолжении научных исследований есть перспективы новых аспектов развития иммунокоррекции на фоне применения циклофосфана.

Morozova Elena

Спасибо за положительную оценку.

Lakhtin Yuriy Vladimirovich

Уважаемые коллеги! Ваше исследование по коррекции имунофаном доказательное, убедительное. В 3 пункте выводов вы пишете "... 90 суткам ...свидетельствует о способности пейеровых бляшек адаптироваться к действию имунофана и циклофосфана." Скажите, пожалуйста, а возможно ли, что лимф. узелки пейеровых бляшек не столько адаптировались к негативному действию циклофосфана, сколько нормализация количества клеток произошла в результате иммунокорекции? В действии имунофана выделяют быструю фазу (2-3 суток- детоксикационную) , среднюю (7-10 сутки - усиление фагоцитарной реакции) и медленную фазу (до 4 мес. - иммунокоррегирующую). Спасибо за ответ. С уважением, Ю.В. Лахтин

Morozova Elena

Спасибо за проявленный интерес к работе, что касается вопроса, то полученные результаты на 90 сутки были связаны с адаптацией органа к воздействию циклофосфана и имунофана, т.к. не было выявлено при помощи применяемых методов исследования признаков иммунокорригирующего и цитостатического эфекта препаратов в отличии от более ранних сроков наблюдения.

Lakhtin Yuriy Vladimirovich

Спасибо за исчерпывающий ответ.

Moyseyenko Valentyna Oleksiivna

Нивелирование действия цитостатиков поможет уменьшить негативные побочные явления длительного их применения. Работа имеет перспективы практического внедрения.

Morozova Elena

Спасибо глубокоуважаемая Moyseyenko Valentyna за положительную оценку работы. Конечно исследования будут продолжены и расширены.

Vokina Vera

Проведен большой объем исследований, работа интересная. А есть ли различия между крысами разного возраста и пола про эффекту препарата?

Morozova Elena

Спасибо за вопрос! Приведенные результаты - это часть научно-исследовательской работы. Исследование в приведеных результатах проводили на крысах-самцах половозрелого возрастного периода массой 210-250 г, помимо этого исследовали неполовозрелых крыс массой 60-90 г, результаты которых здесь не приведены. Исследовали только самцов, с целью исключения циклического влияния половых гормонов на организм самок, и как результат получения достоверных результатов. Старых животных не использовали, поскольку общеизвестный факт инволюции органов иммунной системы в данном возрастном периоде имеет место. Если сравнить оба возраста, хотя это не являлось целью данной статьи, более выраженные и стабильные результаты были получены у половозрелых животных, хотя тенденция результатов была одинакова у обеих возрастных групп.
Comments: 9

Chichkova Marina

Проведена интересная экспериментальная работа. При дальнейшем продолжении научных исследований есть перспективы новых аспектов развития иммунокоррекции на фоне применения циклофосфана.

Morozova Elena

Спасибо за положительную оценку.

Lakhtin Yuriy Vladimirovich

Уважаемые коллеги! Ваше исследование по коррекции имунофаном доказательное, убедительное. В 3 пункте выводов вы пишете "... 90 суткам ...свидетельствует о способности пейеровых бляшек адаптироваться к действию имунофана и циклофосфана." Скажите, пожалуйста, а возможно ли, что лимф. узелки пейеровых бляшек не столько адаптировались к негативному действию циклофосфана, сколько нормализация количества клеток произошла в результате иммунокорекции? В действии имунофана выделяют быструю фазу (2-3 суток- детоксикационную) , среднюю (7-10 сутки - усиление фагоцитарной реакции) и медленную фазу (до 4 мес. - иммунокоррегирующую). Спасибо за ответ. С уважением, Ю.В. Лахтин

Morozova Elena

Спасибо за проявленный интерес к работе, что касается вопроса, то полученные результаты на 90 сутки были связаны с адаптацией органа к воздействию циклофосфана и имунофана, т.к. не было выявлено при помощи применяемых методов исследования признаков иммунокорригирующего и цитостатического эфекта препаратов в отличии от более ранних сроков наблюдения.

Lakhtin Yuriy Vladimirovich

Спасибо за исчерпывающий ответ.

Moyseyenko Valentyna Oleksiivna

Нивелирование действия цитостатиков поможет уменьшить негативные побочные явления длительного их применения. Работа имеет перспективы практического внедрения.

Morozova Elena

Спасибо глубокоуважаемая Moyseyenko Valentyna за положительную оценку работы. Конечно исследования будут продолжены и расширены.

Vokina Vera

Проведен большой объем исследований, работа интересная. А есть ли различия между крысами разного возраста и пола про эффекту препарата?

Morozova Elena

Спасибо за вопрос! Приведенные результаты - это часть научно-исследовательской работы. Исследование в приведеных результатах проводили на крысах-самцах половозрелого возрастного периода массой 210-250 г, помимо этого исследовали неполовозрелых крыс массой 60-90 г, результаты которых здесь не приведены. Исследовали только самцов, с целью исключения циклического влияния половых гормонов на организм самок, и как результат получения достоверных результатов. Старых животных не использовали, поскольку общеизвестный факт инволюции органов иммунной системы в данном возрастном периоде имеет место. Если сравнить оба возраста, хотя это не являлось целью данной статьи, более выраженные и стабильные результаты были получены у половозрелых животных, хотя тенденция результатов была одинакова у обеих возрастных групп.
PARTNERS
 
 
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
image
Would you like to know all the news about GISAP project and be up to date of all news from GISAP? Register for free news right now and you will be receiving them on your e-mail right away as soon as they are published on GISAP portal.